無菌播孢法

取葉背已長出孢子，顏色即將轉變成褐色至完全褐色的孢子葉片
切成0.5公分×0.5公分大小，每10小片裝一小燒杯(不可太多，否則消毒不易成功)。

用75%酒精消毒20秒鐘，再以2%漂白水消毒20分鐘，再以1%漂白水消毒20分鐘
最後以無菌水沖洗2次，接種在不含生長素的1/2MS或MS培養基上。

經過一週左右，即可發芽長出原絲體及小原葉體，但以氮鹽減半的1/2MS培養基較有利於孢子發芽
再一個月左右就可以長出許多配子體，將配子體塊取出放入1/2MS液體培養基懸浮培養二週的時間，即可長出二倍的癒合組織和次配子體。

其中的成熟配子體部分因懸浮培養而使藏精器的精子能與藏卵器的卵結合，達到受精的作用將癒合組織和配子體取出
培養在不含生長素或添加0.2~5ppm苯甲基腺嘌呤(BA)的1/2MS培養基上，三週左右就可以看到單片葉細小的幼孢子體長出
之後會有更多的葉片和根的形成，成為一完整的植株，待小苗長到約3公分左右，即可移出馴化定植。

如果要快速大量繁殖，可將瓶內小苗分切數塊，繼續培養，短時間即可長出多倍的小山蘇苗。
值得注意的是，如果將培植體直接培養在添加0.2ppm BA(F1)的MS培養基內，二個月即可看到球形的癒合組織形成
將其取出繼代培養到1/2MS或MS培養基內培養，二週左右即可看到多芽體的形成。

~無菌播孢~
繁殖種苗流程

►山蘇花葉背成熟孢子

►50倍解剖顯微鏡下，南洋山蘇花的孢子囊

►100倍複式顯微鏡下，南洋山蘇花的孢子

►孢子發芽形成原絲體 孢子培養於含BA的培養基形成癒合組織


►配子體形成

►幼孢子體由癒合組織產生

►由配子體受精後形成的幼孢子體

►繼代培養產生大量幼孢子體