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山蘇的組織培養 | 方法二
發文日:97/09/15
葉原體培養
台灣山蘇花的葉原體存在於其短縮莖裏,將覆蓋於上面黑而多的鱗片拔除之後
用解剖刀取出內部白色微粘的葉原體,分切成0.5公分×0.5公分×0.5公分大小
先用清水清洗後再用75%酒精消毒20秒鐘,其次以2%漂白水消毒20~30分鐘,再以1%漂白水消毒20分鐘,最後以無菌水沖洗二次
取消毒的葉原體接種在添加5ppm BA的1/2MS培養基上,一個月後,將轉成綠色的培植體分切成2~4塊,再放入同配方的培養基上培養
三個月左右可見到芽原體的形成;將芽原體培養在不含生長素的1/2MS半固體培養基上,可直接長出幼孢子體
若將芽原體分切數塊放入1/2MS液體培養基上培養二週則可形成二倍的癒合組織和芽原體
將這些組織取出放入添加0.2~5ppm BA的1/2MS半固體培養基上,則可形成2~5倍的孢子芽
試驗顯示氮鹽減半,蔗糖20公克/公升的1/2MS培養基較有利於芽體的形成,添加酪素水解物(casein hydrolysate) 250mg/1則明顯有利用芽體的生長
將其分切後移入不含生長素的1/2MS半固體培養基上,則會長出葉片和根,成一完整植株
待其長到約3公分左右,即可移出馴化定植,一般以保水力佳的水草介質較有利於瓶苗的成活。
建立葉原體組織培養流程
► 以解剖刀取出台灣山蘇花葉原體
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► 由芽原體發育而形成的幼孢子體
► 幼孢子體之成長
► 幼孢子體出瓶馴化植株
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