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抗大腸桿菌免疫球蛋白(IgY)
發文日:101/01/20
抗大腸桿菌免疫球蛋白(IgY)大腸桿菌的感染為引起仔豬下痢原因之一,早發性大腸菌症常在出生後 10 小時到 7 日內發生,仔豬有下痢、不吮乳、全身乏力、後軀麻痺、常在兩天內死亡,死亡率高達 100%,若較大時發病則死亡率為 70%;而遲發性大腸桿菌症則在 2-4 週齡時發生,先發生黃色軟便,後轉變為慢性化白痢,雖死亡率較低,但是育成會受影響,而離乳後3-4 天也會發生大腸菌引起之下痢,若未治療死亡率也可達 10%,其生長速率降低,使成本提高很多。
這些由大腸菌引起之仔豬下痢目前可用口服或注射抗生素來治療,或是讓母豬在分娩前口服自家活菌疫苗以預防仔豬早發性大腸桿菌下痢。雖然應用抗生素可以治療大腸桿菌,但是對仔豬成長已造成影響,而且有些小豬在治療前即已死亡。
產製抗大腸桿菌蛋黃免疫球蛋白(IgY)方法:
一、雞隻的免疫注射
進行雞隻的免疫注射前,先將抗原以蛋白質的含量來進行定量,將抗原與弗氏完全佐劑以1:1 比例調配成乳化狀液,對母雞進行注射。並在第一次免疫注射後間隔 2、6、12 及 16 週施行補強免疫注射。進行補強免疫注射時,整個免疫流程約 24 週。
二、免疫蛋收集
自免疫注射前一週開始收蛋,以每隻雞為單位,將其每週所生之免疫蛋收集,進行蛋黃與蛋白分離,僅收取蛋黃部分,並將每週第 3 天所生產的免疫蛋分離的蛋黃個別進行冷凍乾燥以分析專一性(E.coli)抗體力價,了解在整個免疫的過程中,雞隻的免疫反應情形。其餘天數所收取之蛋黃混合,存放於-20℃備用,每週皆以相同方式進行,持續收蛋到最後一次免疫完成後的第6週。
三、 蛋黃中 IgY 抗體分離與純化
蛋黃中 IgY 抗體分離與純化以水溶液分離法進行,取經過冷凍乾燥後的蛋黃粉 15 g 以 20 倍(300 mL)去離子水溶解,及未經冷凍乾燥蛋黃 30g 以 10 倍 (300 mL)去離子水溶解,變成蛋黃液後調整 pH 至 5.0,隔夜再將 pH 由 5.0 調至 7.0,離心40分鐘,取上清液以濾紙過濾,最後的過濾液為即 IgY 抗體。
四、試驗結果
試驗結果顯示,有給予抗大腸桿菌 IgY 的蛋黃粉,在下痢情形及糞便中大腸桿菌數量均明顯降低;且於 in vitro 的結果,也顯示試驗組較對照組更具有抑制大腸桿菌增生的效果。