PCV2增殖與ELISA開發 - 農業知識入口網

豬第二型環狀病毒（porcine circovirus type 2；PCV2）為引起離乳後多系統消耗性綜合症（postweaning multisystemic wasting syndrome；PMWS）之主要病原，並對全球養豬業構成重大威脅。該病毒之培養與增殖主要以豬腎臟細胞（PK-15）為宿主細胞，為了提高病毒增殖力價以利後續之試驗研究，因此將PK-15細胞進行限制性篩選（limiting dilution and cell cloning），以篩選出可增殖較高病毒力價之PK-15子代細胞。PK-15細胞經過篩選後，發現其中1株新篩選之子代細胞株相當生長穩定；新篩選與未篩選之PK-15細胞分別接種PCV2病毒後，其增殖之PCV2病毒力價分別為106.5 和104 TCID50/ml。新篩選之PK-15細胞增殖病毒其力價明顯較原先未經篩選之PK-15細胞為高。將新篩選PK-15細胞所增殖之PCV2病毒作為抗原，進一步開發間接酵素連結免疫分析法（Indirect enzyme-linked immunosobent assay；iELISA）用以檢測豬隻血清PCV2抗體。該iELISA對於檢測豬隻血清PCV2抗體具極高特異性，對於檢測其他病毒抗體，包括豬生殖與呼吸綜合症病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome；PRRSV）、假狂犬病病毒（pseudorabies virus；PRV）及豬瘟病毒（classical swine fever virus；CSFV）等均無偽陽性及交叉反應。另外選取385頭豬隻血清樣品，並與市售之商品化PCV2三明治酵素連結免疫分析法（Sandwich ELISA；sELISA） 抗體檢測套組同時進行檢測。檢測結果發現二者之間相關敏感性及相關特異性分別為97.8%和90.7%；而二者實驗結果之一致性與kappa statistic 分別為95.8%和0.86。綜合上述之各項研究顯示本實驗所開發之iELISA對於檢測豬隻血清PCV2抗體具有高特異性與敏感性。