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文/劉振發

一、前言

台灣土雞的保種工作肇始於1982年，由國立中興大學李淵百博士率先著手進行，分別由台灣七個不同的地區蒐集並保存當地土雞。各雞種迄今已繁衍七至八代以上，但因在小族群的保種下，已出現近親衰退的問題。故為了保存這些僓傳資源，除了擴大族群的數目外，生殖細胞的保存亦是一項有效保存這些遺傳資源的方法。

二、精液的急速冷凍

本研究利用Dimethylacetamide(DMA)調配成精液急速冷凍的抗凍液，將公雞的混合精液再加入等量的抗凍液，就置於冰塊間於0℃平衡10分鐘後，立即以微量滴管將含有抗凍劑的精液以小滴(約20-25ul)的形態滴入液態氮中製成粒狀精液，並將12～15粒的冷凍精液裝入冷凍小瓶保存於液態氮中。抗凍液是以市售速保精溶液(豬精液稀釋用500毫升瓶裝，內含33g Dextrose monohydrate、1.85mg Sodium citrate dihydrate、1.85g EDTA、0.8g Sodium bicarbonate、250mg Ampicillin sodium和250mg Dihydrostreptomycin sulfate)來溶入12% DMA。

三、冷凍精液的解凍與精子存活率的檢測

粒狀冷凍精液的解凍步驟是先將0.4ml的速保精溶液裝入玻璃小瓶，置於60℃恆溫水槽中1～2分鐘後取出，再將冷凍小瓶內的粒狀精液(12～15粒)迅速倒入玻璃小瓶混合，隨即將解凍後的精液置於冰塊間，解凍精子的存活是以SYBR-14和PI螢光染劑進行檢測，結果解凍精子的存活率約為50%。

四、授精率與孵化率的檢測

解凍的精液置於冰塊間，攜至現場進行母雞人工授精；計有30隻母雞連續授精3天，從第一天採精後的隔天持續集蛋7天，並將所撿的蛋存放於貯蛋室內(溫度15℃、相對濕度70%)，於七天內共撿蛋80顆。入蛋前先將存放於貯蛋室內的雞蛋取出，置於室溫4至6小時使其回溫，再將雞蛋送入孵化器進行孵化，受精率檢測是於孵蛋後的第7天進行照蛋檢查，並於孵蛋後的第21天計算受精蛋的孵化率，初步結果顯示平均的受精率為50%(40/80)、孵化率為95%(38/40)(如表1)。

五、結語

生殖細胞的保存是一項有效保存遺傳資源的方法，本研究利用Dimethylacetamide(DMA)所配成的抗凍液進行台灣土雞精子的冷凍保存，此方法的建立，將可為臺灣土雞種源保存的方法提供另一個選擇。