組織培養繁苗 - 農業知識入口網

一、 組織培養技術
1.培養程序和培養基
5-6月於晴天的下午在健壯、無病的草莓剛抽出的匍匐莖上取莖尖，大小為0.3-0.4mm，作為組織培養的外植體。

2．操作技術要點及培養條件
(1)滅菌與接種
預處理 為了滅菌徹底，常把接種材料先進行濕潤處理，使滅菌劑能順利地滲入材料。可用多種濕潤劑，我們採用的是75％的酒精，濕潤的時間為半分鐘至1分鐘。

滅菌處理 在草莓組織培養中常用滅菌劑的種類很多。我們曾用過次氯酸鈉10％水溶液(含有效氯0.4—0.5％)，浸泡接種材料10-15分鐘；次氯酸鈣(漂白粉)，用其飽和上清液，浸泡接種材料15-30分鐘；過氧化氫10-12％水溶液浸泡10-20分鐘；新潔爾滅5-10％水溶液，浸泡10-15分鐘；升汞0.1％水溶液，浸泡8-10分鐘。其中前4種滅菌劑對接種材料比較安全，但因滅菌時間較長，常常使接種材料的外層氧化變褐，以致影響培養效果。

接種 以培養無病毒苗為主要目的的草莓組織培養，所接種的莖尖材料很小，在接種時首先要求準確熟練地剝取莖尖生長點，並使用固體培養基比較適宜，接種時應注意不能將整個莖尖埋入培養基中。培養基須用1—1.1大氣壓熱壓滅菌20分鐘。

從材料接種到生根苗長成，這期間的培養溫度一般應穩定在25±2℃。每日光照12小時，光強發2000Lx為宜。培養室溫度在18--26℃範圍內，瓶苗可以正常生長及發根，但在28℃以上時，綠苗普遍變黃，生根率降低，根尖發黃老化，幼苗易產生玻璃化現象。

注意控制光照與溫度、濕度。小苗移栽後，放在溫室內或塑料拱棚內培養，溫度控制在15--20℃，濕度維持在80％左右為宜。同時由於剛移栽的小苗莖桿脆嫩，應盡量採用噴霧狀澆水，水量也不宜過大，落乾後再噴。遮光50％，一周後，可逐漸增強日光照射。

試管苗的苗齡為15天，主根長1．5cm左右，白色無須根，移栽成活率可達90％-100％。

從材料接種到生根苗長成，這期間的培養溫度一般應穩定在25±2℃。每日光照12小時，光強發2000Lx為宜。培養室溫度在18--26℃範圍內，瓶苗可以正常生長及發根，但在28℃以上時，綠苗普遍變黃，生根率降低，根尖發黃老化，幼苗易產生玻璃化現象。

植物組織培養之原理
1．細胞分化全能性:任何單胞擁有與母本相同的遺傳組成，具有發育成與母本相同性狀的潛能。
2．再生:不同植物種類具有不同再生能力，例如:非洲董葉插，可於切口處再生新的植株。增殖:經由細胞分裂，由少變多，由小變大。
3．器官發生:再生的途徑是經由根或芽等器官之形成。體胚發生:再生的途徑是經由胚之形成。
植物組織培養為一基本生物技術。植物之大土繁殖、無病毒植株生產、植物生理、形態、遺傳等研究，均可利用比技術為工具。而且具不受限於季節、度地、在小空間即可完成等優點。
所謂植物組織培養就是將植物的組織、器官、細胞或原生質體作為培植體，經除菌後接種在含無機鹽類、有機物質和植物生長調節劑的無菌培養基，於控制的環境下(光、溫度)誘使培植體生長或分化的技術。此項技術已普遍應用於園藝作物之大量快速繁殖、健康種苗生產、品種改良及種源保存，對於整個園藝產業貢獻頗多。植物利用組織培養大量繁殖主要途徑有三：(一)誘導莖頂或原已存在的腋芽來增殖(二)誘導組織形成體胚，再由體胚發育成植株(三)誘導組織形成癒合組織，再由癒合組織分化成芽體。而組織培養大量繁殖種苗一般可分四個步驟：(一)無菌培殖體的建立，即初代培養(二)培植體大量繁殖，即繼代培養(三)瓶苗的發根(四)瓶苗的健化及移植。
雖然不同植物種類皆有不同的培養部位和培養基配方，但仍有一些技巧可遵循。除某些再生能力強的植物如虎尾蘭、琴葉榕、椒草和部份黛粉葉品種可用葉片培養誘導癒合組織長出植株外，大部份觀葉(切葉)植物為單子葉植物，為求培養成功，以莖頂或莖節的側芽作為培植體，成功率很高，而配方以MS或1/2MS添加BA 2-4mg/L和NAA 0.1-0.5mg/L，可誘導側芽長出，爾後再修正配方找出較佳的增殖配方。植物的斑葉發生，若由突變而造成的嵌合體(chimera)，則由組織培養方式繁殖，經誘導其頂芽或側芽之生長或增殖的途徑，斑葉較能維持，若繁殖的途徑產生癒傷組織、不定芽或體胚發生而繁殖植株，則常不能維持斑葉形式。由於組織培養技術只是生物技術的一項工具，不算是高深的學問，只要作物做得廣、做得多，從失敗中記取教訓，自然可學到其中的竅門。無論從事組織培養研究或生產者，應時常留意培植體的生長情形，有耐心地等待生長，多加觀察與記錄就會有意想不到的發現與結果。

組織培養(tissue culture) 一詞可算是一個定義不算明確的集合名詞，不論器官培養、胚胎培養、組織（癒傷組織）培養、液態懸浮培養、細胞培養等都稱為組織培養，所以以前歐美將它當做概括性的名詞，但現在已有所區分。目前在臺灣大多數人，甚至於許多科學家都還沒將它分清楚，就只用組織培養一言以蔽之。

分離少數植物細胞，利用人工培養基，維持植物生長的技術，
單一細胞團形成癒合組織，可行繼代培養及增殖，特定情況下，癒合組織能再分化產生根或枝葉，進而成為功能完整的植株。