利用多目標PCR檢測基因改造木瓜 - 農業知識入口網

木瓜產業受到木瓜輪點病毒(papaya ringspot virus, PRSV)的嚴重威
脅，產量大減，中興大學植物病理系教授葉錫東博士培育的抗輪點病毒基因
改造木瓜，可有效降低此病毒的威脅。但因基因改造作物是否影響生態及食
用安全性之疑慮，政府單位及消費大眾均極關切基因改造木瓜的檢測。本研
究利用PCR 反應，進行核酸層次的檢測，以針對PRSV 外鞘蛋白基因(coat
protein, CP)設計專一性之引子，可以增幅一820 bp 之DNA 片段，正確檢測
出基因改造木瓜。為提高檢測之精準性及效率， 同時開發出多目標
PCR(multiplex PCR)技術，針對殖入木瓜之多個基因及DNA 序列做為檢測
對象，包括PRSV CP 基因、NPT-II(neomycin phosphotransferase)基因、
NOS(nopaline synthase) terminator 序列、及CaMV(cauliflower mosaic virus)
35S promoter 序列等設計專一性引子，利用多組核酸引子，同時進行PCR
反應，在基因改造木瓜中可分別增幅359 bp、295 bp、180 bp、及134 bp
四個片段；再加上木瓜本身的木瓜酵素(papain)基因之專一性引子(增幅211
bp)，做為內部對照(internal control)達到多重確認基因改造木瓜檢測精準性
之效果。