07陳姿菡-口蹄疫及豬水病抗體間接型ELISA檢測方法之研發 - 農業知識入口網

本試驗針對口蹄疫（FMD）及豬水疱病（SVD）等豬隻高度傳染水疱性疾病，主要利用原核表現系統完成建立此二種疾病區別診斷之FMDV及SVDV 間接型ELISA抗體檢測方法。針對FMDV結構蛋白（SP）VP1免疫決定位之基因組核酸序列設計引子，以RT-PCR 方法增幅病毒核酸，建構基因重組原核表現系統，並量產重組結構蛋白應用於ELISA之開發。經試驗結果顯示分子量如預期之大小約25 kDa，且重組蛋白質與豬抗血清之分析特異性呈陽性反應。以免疫、感染及SPF等豬血清之FMDV-SP抗體檢測診斷敏感性達 84.1 %-96.7 % 及診斷特異性約達93 %-100 %。另設計豬水疱病病毒 SVDV-SP之免疫決定位之核酸序列之特異性引子，以RT-PCR 方法增幅病毒核酸，建構基因重組原核表現系統，並定序確認核酸序列符合，且重組蛋白分子量如預期之大小約100 kDa，可與豬抗血清呈專一特異性之陽性反應。於SVDV-SP ELISA之結果顯示本方法的最低分析敏感性可達10^-2倍，且於30支標準血清檢測結果最早在感染後第6天可被測出SVDV-SP抗體，其診斷敏感性及診斷特異性皆可達100 %，於進口豬隻及田間之血清樣品經與二種商品化ELISA 套組比較SVDV-SP抗體檢測結果符合率各別為90-93 % 及 85-88 %。最後證實FMDV及SVDV抗體間接型ELISA檢測方法可檢出專一性的抗體而無交叉反應，且不會與水疱性口炎（VS）抗體產生非特異性反應。