嗜水性產氣單胞菌ａ溶血基因之選殖 - 農業知識入口網

嗜水性產氣單胞菌Aeromonas hydrophila二十七病原菌株，由感染之水產生物病變部位分離出，用做篩選溶血基因之來源。以羊血培養基作溶血菌表面培養時，可尤其溶血督速之徐徐釋出，所形成之溶血環的澄清或半透明，將之區別為a型(不完全溶血)及B型(完全溶血)。受篩檢之二十七嗜水性產氣單胞菌珠，依此標準可分為三大類。三菌株之溶血表現型，於血液培養基表面，形成混濁之半透明狀溶血環，歸類於a型。十六菌株之溶血環為澄清切透明，因此可歸之於B型。但其中八菌株於血液培養基表面，不顯現溶血現象。檢測二十七株嗜水性產氣單胞菌，是否攜有質體及帶抗藥性，於鹼性溶解法分離質體時，結果十菌株於0.7%洋菜膠電泳分離，以EtBr染色觀察證實帶有質體。其餘十七菌株則不帶質體。又每一個菌株，塗抹於TBS洋菜培養基添加不同抗生素之平板上，培養生長檢測抗藥性，結果就抗藥菌株數目而言，抗streptomycin, ampicillin及erythromycin抗藥菌株分別多達17,16及15菌株，可視為嗜水性產氣單胞菌之自然抗藥性。其次kanamycin, tetracyclin及erythromycin抗藥菌株，分別為11,10及9菌株。而chloramphenicol抗藥菌株最少，僅有5菌株。表現a溶血型之嗜水性產氣單胞菌AH20菌株，不帶有質体，且僅對ampicillin及erythromycin具抗藥性，因此其溶血基因之緩慢釋出機制，適合用作替代基因選殖用，且易於用抗生素控制，因此由其染色體，利用Hind III酵素剪切，轉殖於pJDC64載體，選殖a溶血基因。由2400重組質體中，篩選出一pAH20a3於Escherichia coli DH5a細胞轉型篩選，仍可測得a溶血遺傳性狀重複表現，顯示此Hind型篩選，仍可測得a溶血基因性狀重複表現，顯使此hind III DNA片段帶有a溶血基因。以羊血紅血球作溶血測定，僅菌體生長之未經純化之懸浮液，即可測得溶血質為4溶血單位。因此確定轉殖之hind III DNA片段，確帶有a溶血基因，此pAH20a3所攜帶之DNA片段約為3.3Kb。