經濟魚類各種基因轉殖技術的開發 - 農業知識入口網

利用顯微注射的方法將帶有黑色素基因的質體ptrTYR5打到白色變種鯰魚肌肉，結果發現33%處裡的白色鯰魚在注射的背部區域則逐漸消失。而在打不含DNA溶液的背部區域就沒有黑斑顯出。而實驗組對外來基因有正反應的程度則因個體和部位而有所明顯差異。外來的生長激素基因京電破方式進入黑鯛的受精卵內。在90種不同的電破條件配合下，我們發現3kv電壓2(11)脈衝數及8個週期的處裡可以得到最高的活存率及孵化率。但是和控制組相比，仍顯示活存率的降低，如從44-80%降至30-50%；同時孵化率也會從38-54%降至24-37%。用點墨、南方氏浸法和PCR的方法都可以偵測到七天大得小魚含有轉殖近來的基因。其轉殖率約15%。先在不加外源性異質基因下對泥鰍箕子懸浮液進行電破，分別觀察不同系數組合如電壓從2至12kv，穿孔時間從0.8到1.6 sec，脈衝數從2(6)至2(11)週期數從2至12，對精子的影響。結果發現對精子運動能力的影響最明顯的是電壓。電壓到8kv以上在顯微鏡觀察處裡過的精子其的運動能力下降；若10kv以上時即看不出有運動能力。而電破後精子的運動能力又與雄魚的成熟度有關。對電破處裡的精子做人工授精結果證明:電擊沒有含DNA的精子其受精率為76%和孵化率68%；與不處理的精子的88%受精率和72%的孵化率相比稍微下降。而對電擊含DNA的實驗組而言，則降低較顯著:如受精率降至72%和孵化率降至61%。處理外源基因的精子受精後所發育的魚苗，精點墨雜合分析其genomic DNA，證明含有外源基因的魚苗有52%。若再用南方氏雜菌分析其EcoRI所切的genomic DNA 發現轉殖於除了含有與轉殖DNA一樣大小之外，也有大段以及小段得正反應DNA條紋存在。從這些證據充分顯示無論是皮下顯微注射、受精卵電破或者精子電破法都能成功低將外來基因片斷轉殖到不同的經濟魚類。因此，這些技術的開發和建立對臺灣經濟魚類的基因轉殖研究事項重要的基礎。