PCV2增殖與ELISA開發
豬第二型環狀病毒(porcine circovirus type 2;PCV2)為引起離乳後多系統消耗性綜合症(postweaning multisystemic wasting syndrome;PMWS)之主要病原,並對全球養豬業構成重大威脅。該病毒之培養與增殖主要以豬腎臟細胞(PK-15)為宿主細胞,為了提高病毒增殖力價以利後續之試驗研究,因此將PK-15細胞進行限制性篩選(limiting dilution and cell cloning),以篩選出可增殖較高病毒力價之PK-15子代細胞。PK-15細胞經過篩選後,發現其中1株新篩選之子代細胞株相當生長穩定;新篩選與未篩選之PK-15細胞分別接種PCV2病毒後,其增殖之PCV2病毒力價分別為106.5 和104 TCID50/ml。新篩選之PK-15細胞增殖病毒其力價明顯較原先未經篩選之PK-15細胞為高。將新篩選PK-15細胞所增殖之PCV2病毒作為抗原,進一步開發間接酵素連結免疫分析法(Indirect enzyme-linked immunosobent assay;iELISA)用以檢測豬隻血清PCV2抗體。該iELISA對於檢測豬隻血清PCV2抗體具極高特異性,對於檢測其他病毒抗體,包括豬生殖與呼吸綜合症病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome;PRRSV)、假狂犬病病毒(pseudorabies virus;PRV)及豬瘟病毒(classical swine fever virus;CSFV)等均無偽陽性及交叉反應。另外選取385頭豬隻血清樣品,並與市售之商品化PCV2三明治酵素連結免疫分析法(Sandwich ELISA;sELISA) 抗體檢測套組同時進行檢測。檢測結果發現二者之間相關敏感性及相關特異性分別為97.8%和90.7%;而二者實驗結果之一致性與kappa statistic 分別為95.8%和0.86。綜合上述之各項研究顯示本實驗所開發之iELISA對於檢測豬隻血清PCV2抗體具有高特異性與敏感性。
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