番茄‘花蓮亞蔬五號’以農桿菌法轉殖Bt基因之研究--討論-1 - 農業知識入口網

影響農桿菌轉殖效率有很多因素，除了組織培養條件之外，農桿菌感染植物培植體的濃度非常重要，一般認為以農桿菌轉殖番茄基因時最適合濃度為O.D.600約為0.4-0.8（Fillatti et al., 1987；Frary and Earle,1996），Ellu等人（2003）也將共培養菌液濃度減少到每毫升有102-103個農桿菌（O.D.660＝0.1-0.15），可使番茄品種p73的轉殖效率從2.5%提高到11.2%。王和林（2007）試驗結果顯示以O.D.600=0.8-1.0菌液濃度轉殖效率較O.D.600＝0.6-0.8處理者差，Gao等人（2009）養菌養到O.D.600＝1.0再稀釋至0.1後感染番茄時轉殖效率較佳，與本研究結果相符（表一），因此在感染培植體時將農桿菌稀釋至較低的濃度將可增加轉殖效率。
此外影響轉殖效率的因子尚包括所構築的載體及基因，本研究結果顯示轉殖Cry1AC、Cry1IC載體之再生植株在第1次篩選時有7及16個、33及41個通過抗生素篩選（資料未顯示），在第2次篩選後擬轉殖植株分別僅剩2及3株及28及33株，其中轉殖Cry1AC基因之再生植株共5株，Bt基因偵測結果皆為陰性，而轉殖Cry1IC基因者亦有42.9及36.4%為陰性（表一），表示仍有許多再生植株雖然通過抗生素篩選但為假陽性，這些再生植株多半在轉換到含抗生素生根培養基便會白化死亡。Cheng等人（1998）利用不同的載體分別轉殖Cry1A(b)及Cry1A(c)基因進入水稻中，結果顯示從不同的癒傷組織再生轉殖植株的比例不同，不同的載體亦有相當的差異，在轉殖過程中甚至有少許報導基因與Bt基因分離的現象，因此表一所出現的假陽性現象植株有少部分有可能是在轉殖過程中NPTII基因與Bt基因分離所造成的現象。而轉殖Cry1AC基因處理最後沒有獲得轉殖株，可能是不同載體構築所造成的影響。