栽培方式對黨參植株各部位的黨參炔苷及抗氧化能力之影響--材料與方法--04 - 農業知識入口網

四、抗氧化能力評估試驗

（一）DPPH自由基清除能力（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)radical scavenging capacity）DPPH（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）（Merck Ltd.,Taiwan）是一種穩定的自由基，當DPPH溶於乙醇中會呈現深紫色溶液，DPPH自由基清除能力測試是一種常被使用的抗氧化指標試驗，為測試待測物是否具有抗氧化力的一種簡單篩檢試驗。於波長517nm下有較強吸光值，當加入的待測樣品後，其中抗氧化物質可與DPPH自由基直接反應，阻斷DPPH自由基的連鎖反應，使原本呈現深紫色的DPPH溶液轉變成澄清的黃色，表示加入的待測樣品具有捕捉DPPH自由基的能力，所呈現的顏色愈淡，則表示捕捉DPPH自由基的能力愈強，亦即此待測樣品的抗氧化能力愈高（Blois,1958）。
分別取25µl樣品萃取液置於塑膠96孔微量盤內，再依序加入175µl DPPH乙醇溶液（0.3mM），震盪混合均勻後，避光靜置，於室溫下反應30min，本試驗為每一樣品三重複，以全波長酵素免疫分析儀（BioTek µQuant）偵測其在波長517nm下之吸光值，利用相對於空白對照組的吸光值下降百分比，可判定各試驗樣品清除DPPH自由基的能力強弱，當DPPH被試驗樣品中抗氧化物（antioxidant）還原時，其吸光值會降低，吸光值愈低表示試驗樣品清除DPPH自由基之能力越強，即抗氧化能力愈高（Bamba et al.,2018）。DPPH自由基清除百分率的計算公式如下列所示：
DPPH自由基清除百分率（%）＝（1－《實驗組吸收值／對照組吸收值》）×100，計算出DPPH自由基清除百分率後，再與由標準品維生素E建立之定量檢量線，進行抗氧化能力之維生素E相對含量換算。維生素E定量檢量線各點配製濃度為100、200、300、400、500µg/ml，維生素E檢量線之R2=0.9957[y=183.01x-7.2126,y代表DPPH自由基清除百分率（%）;x代表維生素E濃度（µg/ml）]，將DPPH自由基清除百分率換算成維生素E相對含量，單位以mgg-1DW表示，並計算其平均值及標準差。