進口大豆抗嘉磷塞除草劑之測定及其基因特性之探討 - 農業知識入口網

台灣消費之大豆主要依賴每年自國外輸入約200萬噸之大豆種子，由零售市場購得之種子大部分具生物活性，本試驗於溫室播種採購之大豆，豆株幼苗期噴施嘉磷塞1.8kg/ha，非轉殖株於施藥後三至四日呈現傷害徵狀，二週內即死亡。豆株中35-47﹪不受嘉磷塞影響者，應為抗藥性之轉基因大豆。本研究以此大豆葉片及種子，進行PCR及CP4 EPSPS基因特性之研究。抽取大豆幼葉之genomicDNA，由CaMV35S promoter及NOS terminatorDNA序列設計兩個primers，行聚合酵素鏈鎖反應測定，鏈合反應溫度於56至70℃之間，轉殖株大豆均可產生約1.8kb之單一DNA片段，非轉殖株則無此DNA片段。鍊合溫度為68℃條件，templateDNA可偵測極限為0.1ng。PCR產物經接合，轉型反應及定序，此1.8kbPCR產物係由35S promoter之DNA片段(106bp)、矮牽牛葉綠體transit peptide DNA片段(20bp)、全長CP4 EPSPS DNA(1368bp)及NOS3’DNA片段(102bp)組成。由Nested PCR結果，轉殖株大豆者經四組專一性引子之反應及電泳分析，分別測得約680、822、144及129bpDNA片段。轉殖株與非轉殖株大豆葉片之genomicDNA，以32P-CP4 EPSPS為探針之南方氏雜合反應，顯示轉殖株之genomic DNA，可辨識二至四個DNA片段，非轉殖株則無此可辨識之DNA片段。轉殖株大豆之葉片、種子、市售之豆漿、豆腐經35S/CTP-R及NOS/EPSPS-3專一性引子之PCR檢測，分別測得約144及129bpDNA片段。