蝴蝶蘭 DNA增幅指紋技術之研究 - 農業知識入口網

本研究之目的，在探討及建立有效之蝴蝶蘭DNA增幅指紋(DNA amplification finger-printing, DAF)分析技術，由實驗結果顯示，以修正過之Gawel及Jarret方法進行DNA之抽取，每公克鮮重蝴蝶蘭材料約可得到165-330 μg DNA，試驗較佳之聚合(fa41)連鎖反應(poly- merase chain reaction, PCR)條件為取20 ng DNA， 0.5 U Taq DNA聚合(fa41)(poly- merase)，6 pmole引子(primer)，及200 μM去氧核糖核(fa42)三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate, dNTP)於10 μl反應液，在94-36-72℃(60-7-70秒)做2循環；94-40-72℃(6-7-70秒)做55循環，這些反應液再經瓊脂(agarose)膠體電泳分析配合溴化乙錠(ethidium bromide, EtBr)染色可呈現良好之圖譜結果，實驗結果亦顯示如以聚丙烯醯胺(polyacrylamide)膠體電泳分析—銀染色(silver stain)，反應液只需1 μl，且解析度可比一般瓊脂膠體電泳分析溴化乙錠染色增加3-5倍，建立之DAF增幅指紋將可用來區分蝴蝶蘭原生種或栽培種，及篩選蝴蝶蘭園藝性狀之分子標誌。