金絲桃屬植物抗氧化能力比較分析--材料與方法-2 - 農業知識入口網

二、抗氧化能力試驗
（一）氧自由基清除能力（Oxygen radical absorbance capacity, ORAC）
取樣品萃取物25 μl置入於96孔微量盤中，依序加入75 mmol磷酸緩衝溶液75 μl、38.4 nmol螢光物質（Fluorescein）75 μl及64 mmol自由基誘導物（AAPH）25 μl，混合後於螢光分析儀檢測，設定螢光檢測激發光為485 nm，放射光528 nm，每90s檢測紀錄螢光強度，並以Trolox製作標準曲線，求出回歸方程式，換算出樣品中總抗氧化能力值。
（二）清除DPPH（α,α-diphenyl-β-picryhydrazyl）自由基能力
取4 ml樣品萃取物，加入0.75 mmol DPPH試劑1 ml，混合靜置反應30min，於517 nm測定吸光值。計算公式如下：
        Scavenging effects（%）=【1-（樣品A_517nm / 控制組A_517nm）】×100
       樣品於濃度25 mg·L^-1、50 mg·L^-1、100 mg·L^-1、200 mg·L^-1之清除力可作一濃度對    
       清除力之曲線，而清除力達50%時之有效濃度即為IC₅₀。
（三）還原力（Reducing power）
取2.5 ml樣品萃取物，依序加入pH 6.6 Phosphate Buffer Solution溶液2.5 ml、1% Potassium ferricyanide 2.5 ml，混和後於50℃水浴反應20min後，於-20℃之冰箱中急速冷卻，再加入10% Trichloroacetic acid溶液2.5 ml，混和後以5000 rpm離心10min，取上清液5 ml，再加入蒸餾水5 ml、0.1% FeCl₃溶液1 ml，混合反應10min，於700 nm測定其吸光值。