運用簡併式引子對檢測病毒－以Potexvirus為例 - 農業知識入口網

植物病毒病害田間目視診斷除了少數具特殊病徵如嵌紋、輪紋、捲葉及壞疽等病徵可資判斷外，亦可藉由可能之媒介昆蟲輔助研判，但在田間診斷鑑定時，對於病毒科或屬皆無法區分，僅能初步推測可能為病毒感染。一般常用的酵素連結抗體免疫分析(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)進行血清學診斷，也需事先準備可能之抗體並與病組織之病原產生正確的陽性反應才能獲知可能之病毒為何。但當此病毒病害為新發生之病毒病，則需仰賴其他診斷方法才有可能正確診斷鑑定，例如電子顯微鏡法、生物檢定法、簡易光學顯微鏡診斷法、利用分子生物技術等方法進行診斷鑑定等，其中利用分子生物學進行診斷鑑定在近年來不斷地蓬勃發展。尤其植物病毒無法人工培養加上各屬病毒之間序列差異極大，因此針對單一屬病毒保守性序列所設計之簡併式引子對進行聚合酶鏈鎖反應可視為對未知病毒之診斷鑑定的有力工具。許多病毒屬的簡併式引子對已被開發，並有許多實際應用的例子，例如Hrp5/oligo-dT(14)引子對可檢測Potyvirus屬病毒、Tobamo-1/Tobamo-2引子對可檢測Tobamovirus屬病毒，CPTALL-5/CPTALL-3引子對可檢測Cucumovirus屬病毒，gL3637/gL4510c引子對可檢測Tospovirus屬病毒以及PAL1v1978/PAR1c715引子對可檢測Begomovirus屬病毒等等，利用簡併式引子對進行增幅後檢測除可判斷是否為該屬病毒外，可進一步選殖定序進一步確認為何種病毒甚至是屬於何種系統(Strain)，在實際應用上為相當好用之工具，本文將針對如何設計簡併式引子對及其原理進行說明。