番茄與茄科作物種子類病毒檢測作業流程建立 - 農業知識入口網

類病毒是一種具有傳染性的環形單鏈RNA病原體，比病毒小，介於250至400個核苷酸、可形成二級結構且沒有典型病毒的蛋白質外殼。為絕對寄生物，專一性很強，通常感染高等植物並侵入植物細胞核內進行複製，常可藉由種子或花粉傳播。近年我國茄科作物種子進出口量逐年增加，而許多類病毒，如馬鈴薯紡錘塊莖類病毒(potato spindle tuber viroid, PSTVd)與番茄黃色矮化類病毒(Tomato chloroticdwarf viroid, TCDVd)等，會藉由媒介昆蟲感染不同的茄科作物，病害發生風險增加。本場為協助防檢局執行輸出種子植物病原之檢測，於2014年11月29日至12月06日期間，赴澳參訪位於澳洲墨爾本的AgriBiocenter農業生物科學研究中心、Knoxfield檢疫站等單位，並參考該國檢定標準建立番茄與茄科作物種子類病毒(Pospiviroidsof tomato and capsicum seeds)檢測作業流程，診斷方法以兩階段式反轉錄聚合酶鏈鎖反應(2-steps reverse transcription polymerase chain reaction)進行，可檢測馬鈴薯紡錘形塊莖類病毒、番茄黃色矮化類病毒、辣椒小果類病毒(pepper chat fruit viroid, PCFVd)、番茄頂矮化類病毒(tomato apical stunt viroid, TASVd)、番茄類病毒((tomato plantamacho viroid, TPMVd)、金魚藤潛伏類病毒(columnealatent viroid, CLVd)等六種類病毒。本方法利用4組引子對NADH-F/NADH-R、DHL-55F/DHL-56R、Pospi1F/Pospi1R、CLV4F/CLV4R等進行反轉錄聚合酶鏈鎖反應，其中NADH-F/NADH-R為植株常態表現之核醣核酸RNA偵測引子對，為比對RNA萃取效能之引子對，產物大小為188 bp；DHL-55F/DHL-56R可偵測PSTVd與TCDVd，產物大小為354 bp；Pospi1F/Pospi1R可偵測PSTVd、TCDVd、TASVd、PCFVd與TPMVd，產物大小為196-228 bp；CLV4F/LV4R引子對則偵測CLVd，產物大小為373 bp。目前檢測流程已經由動植物防疫檢疫局公告並委由種苗場提供收費檢測服務。