番茄‘花蓮亞蔬五號’以農桿菌法轉殖Bt基因之研究--材料與方法-4 - 農業知識入口網

八、供試昆蟲飼養及生物檢定
自花蓮縣吉安鄉採集斜紋夜蛾（Spodoptera litura）幼蟲，將之飼養於27℃，光週期為12 hr照明，12 hr黑暗之生長箱。1-2齡幼蟲飼養於直徑9 cm、高5.5 cm之塑膠容器中，並餵以人工飼料（Flowering bean 150g/L, Yeast powder 60g/L, Wheat germ 55g/L, L-Cysteine 0.6g/L, L-Ascorbic acid 6g/L, Sorbic acid 1.5g/L, Methyl-p-hydroxbenzoate 1.75g/L, Formalin 24% 3ml/L, Agar 37.5g/L）。3齡後的幼蟲因具自殘性，故分開飼養於30孔盤中。成蟲則置於直徑20 cm、高30 cm之透明壓克力圓柱筒中，內襯擦手紙巾，並置糖水供成蟲吸食，約5天後採卵供繼代用。本試驗採用繼代後之斜紋夜蛾二齡幼蟲作為供試昆蟲。
選擇轉殖植株、只轉殖載體的轉殖株（Vector control）及沒有轉殖的植株（Wild type）成熟度相同的葉片，Vector control與Wild type為對照組，取下前面3片小葉，小葉前端插入含水之2.0 ml平蓋離心管中以防失水，再放入透氣透明的塑膠盒子中，每個透明盒子放入10隻斜紋夜蛾二齡幼蟲，每一個轉殖株共5盒作為重複，定時計算幼蟲啃食過之葉面積，與取食前之總葉面積相比後，換算為取食率。另外並於餵食試驗過程中每天記錄幼蟲死亡隻數，將其換算為死亡率。觀察未經農桿菌轉殖之對照組之取食情形，等到對照組大部分被幼蟲取食完畢時即停止實驗，取出葉片及蟲體攝影及記錄。