細菌性軟腐病菌之拮抗菌篩選及其病害防治效果評估--08
六、拮抗菌功能性基因分析
功能性基因分析,利用不同專一性引子對(Soares et al., 2015)進行 PCR,包括以 itu C - F (5' - TTCACTTTTGATCTGGCGAT - 3') 與 itu C - R (5' - CGTCCGGTACATTTTCAC - 3') 、 itu D - F (5' - ATGAACAATCTTGCCTTTTTA - 3') 與 itu D - R (5' - TTATTTTAAAATCCGCAATT - 3')增幅伊枯草菌素基因(iturin gene, ituC, ituD)、以 B A - F (5' - TGAAACAAAGGCATATGCTC - 3')與B A - R (5' - AAAAATGCATCTGCCGTTCC - 3')引子增幅桿菌抗黴素基因(Bacillomycin A gene, BA)、以 F D - F (5' - CCTGCAGAAGGAGGAGAAGTGAAG - 3') 與F D - R (5' -TGCTCATCGTCTTCCGTTTC - 3')引子增幅豐原素基因(fengycin D gene, FD)、以 sfp - F (5' - ATGAAGATTTACGGAATTTA - 3') 與 sfp - R (5' - TTATAAAAGCTCTTCGTACG - 3') 引子增幅表面活性素基因(surfactin gene, sfp)。PCR 反應條件設定為 95°C 變性(denaturing)2 min 後,接著 30 次循環的反應如下:95°C 變性 1 min,52°C 黏合(annealing)30 s,72°C 延長(extension)1 min 30 s;最後加上 5 min 72°C 的延長反應,結束後以 1% 瓊脂膠進行膠體電泳,確認是否具有條帶。
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