花改場--萱草‘花蓮7號-豐美’之育成--05 - 農業知識入口網

四、金針菜鮮蕾芸香苷含量測定

將萱草‘花蓮 7 號-豐美’、‘臺東 6 號’以及‘黃花金針菜’之新鮮花蕾物料乾燥後磨粉，並分別秤取樣品粉末 0.2-1 g，置離心管中，再分別加入 50 %甲醇 10-30 ml，超音波振盪處理 30 min 後，將離心管至於離心機，並以 9,000 rpm 及離心 15 min，收集上清液，殘渣部分重複提取 2-3 次，合併提取液，加同濃度甲醇至定容刻度，混合均勻再過濾（Syringe filter, PTFE 0.22 μm）（Du et al., 2014）。

所獲得提取液，取 10 μl 之溶液，使用管住 LiChrosorb® RP-18 HPLC Column（5 μm particle size, L × I.D. 25 cm × 4.6 mm）分析管柱，以及 YMC-Pack Pro C18 Guard cartridge column（5 μm 4.0×20 mm）保護管柱。移動相組成以 0.1%三氟醋酸溶液和 100%乙腈隨時間進行混合建立有機相濃度梯度，用流速 0.8 ml/min，偵測 UV 波長 330 nm，總分析時間 66 min。Controller（WatersTM600, Waters, USA）、Autosampler （Waters 717 plus, Waters, USA）、PDA Detector（Waters 2996, Waters, USA）、Dual Absorbance Detector （Waters 2487, Waters, USA）、（Que and Zheng, 2007）。分析軟體為 Empower 3，為進行萱草花蕾 HPLC芸香甘定量之色譜資料處理軟體。

五、銹病與褐斑病調查

於民國 111 年至 112 年調查萱草‘花蓮 7 號-豐美’、‘臺東 6 號’以及‘黃花金針菜’，每品種（系）之調查 30 叢（一重複 10 叢，3 重複），以每叢心葉第 8 葉之罹病等級，罹病等級對應罹病面積率如下：0：無病斑；1：5 %以下；2：5-10 %；3：10-25 %；4：25-40 %；5：40-65 %；5：40-65 %；6：65 %以上（許，2014）。再將罹病等級換算成罹病度（%），換算公式如下:

罹病度（%） = Σ（罹病指數 × 該指數之罹病數）/（6 ×調查總數） × 100

由罹病等級調查結果，評估其抗感病等級。極抗（highly resistant, HR）級為完全不發病；抗（resistant, R）級為罹病度達 0.1-1 %者，中抗（moderately resistant, MR）級為罹病度達 1.1-5 %者；中感（moderately susceptible, MS）級為罹病度達 5.1-15 %者；感（susceptible, S）級為罹病度達 15.1-2 5%者；極感（highly susceptible, HS）級為罹病度達 25 %以上者。