鐵炮百合癒傷組織再生系統應用於基因轉殖之研究初報 - 農業知識入口網

為進行鐵炮百合基因轉殖，先行建立癒傷組織再生系統，培養大量具有強再生能力之癒傷組織培植體，以供基因轉殖研究用。在誘導癒傷組織方面，由鐵炮百合自交胚珠培養，獲得一生長活力旺盛的癒傷組織細胞系「LG41」，外觀淡黃色，呈粉末狀或小顆粒狀，在含2,4-D(3.0 mg/l)及BA(0.25 mg/l)的MS培養基上，可不斷產生新的癒傷組織，形成一循環再生系統，移到不含植物生長調節劑的培養基上培養，能再生完整植株。此外，鐵炮百合花絲容易誘導產生癒傷組織，其成功率為91.8%，因此亦適合作為農桿菌基因轉殖試驗用培植體。以農桿菌轉殖法進行試驗，將鐵炮百合幼嫩花絲浸漬帶有GUS和抗hygromycin基因的農桿菌液，進行感染，花絲浸漬的時間為10, 20, 30分鐘三種處理，花絲與農桿菌共培養時間為1, 2, 3日三種處理，分別進行試驗。結果分花絲與農桿菌液浸漬的時間以30分鐘效果較佳，與農桿菌共培養的時間以2日較佳。花絲培養之後產生綠色癒傷組織，在含有40 mg/l hygromycin選擇性培養基上培養，可存活一段時間，但在培養51天之後全部褐化。另以基因槍轉殖法進行試驗，先行純化抽取含GUS及抗hygromycin基因之DNA，包覆在金粒子上，再以Bio-Rad PDS1000/He粒子傳送系統，打進鐵炮百合癒傷組織LG41之細胞內。轉殖後取癒傷組織以組織化學法檢測，結果部份細胞呈藍色反應，顯示已有GUS基因暫時性表達現象。