種帶大豆莢腐病菌之檢測 - 農業知識入口網

台灣唯一經國際種子檢查協會(International Seed Testing Association，ISTA) 認證之種子檢查室，於2012年6月改由農委會種苗改良繁殖場(以下簡稱本場)承接。為因應國際貿易對種傳病原檢測需求提高，本場未來將增加種子健康檢查(Seed health testing)的服務，依國內出口需求逐項申請認證並積極參與ISTA各種種子健康檢查事務。2013年本場首次參與ISTA種子健康檢查能力測試(Proficiency test)，測試項目為大豆種子莢腐病(Phomopsis seed decay on Glycine max) 檢測。大豆種子莢腐病之病原菌為一複合菌系(complex) ，其中引起豆莢乾枯與莖枯病徵者為Diaporthe phaseolorum f. sp. sojae (anamorph P. phaseoli)；北方大豆莖枯病為D. phaseolorum f. sp. caulivora；莢腐病為P. longicolla；南方大豆莖枯病為D. phaseolorum f. sp. meridionalis，亦可感染根部造成根腐，或危害幼苗形成猝倒病徵。本次測試樣品由法國GEVES(Le Groupe d'Etude et de contrôle des Variétés Et des Semences)準備，共計5個大豆種子樣品(編號1~5)，每個樣品均包含400顆種子；其中健康種子取自法國，而帶菌種子則來自義大利，樣本收到後均保存於4°C。測試方法依ISTA公告之大豆莢腐病(Phomopsis seed decayon Glycine max)檢測流程進行。待測種子經表面消毒後，培養於酸性馬鈴薯葡萄糖瓊酯培養基(aPDA)並觀察菌落形態，於第3天及第7天進行調查及記錄。對照用菌株為亞洲-世界蔬菜中心(AVRDC)真菌研究室所提供之台灣產D. phaseolorum var. sojae (anamorphP. phaseoli, syn. P. sojae)。試驗組與對照組同樣以aPDA培養於25°C、無光照之生長箱，結果顯示兩個調查時間點(第3天與第7天)，5個樣品經肉眼判定帶有大豆莢腐病菌之比率依序(1~5)為：4.25與8.75%、0與0%、8.75與13%、5.25與8.75%及0與0%。為確認檢測結果，切取疑似Phomopsis之菌絲尖端進行純培養，增量菌絲後萃取去氧核醣核酸，以專一性引子ITS 1F與ITS 4進行ITS區間序列增幅後，進行核醣體核酸內轉錄區(internal transcribed spacer, ITS)序列解序分析。解序結果於線上基因庫(GenBank) 進行比對，確認所檢測的12個分離菌株中，9個菌株為D. longicolla，3個菌株為D.phaseolorum。本次ISTA種子健康檢查能力測試結果報告指出本場在2個健康種子樣本中未檢出病原菌，無偽陽性情形發生；在3個帶菌種子樣本中檢測結果落於「標準分數(z-score)」絕對值2以內，在27個參與檢查室中評比結果為A。