甘藍小孢子培養影響因子之優化研究 - 農業知識入口網

甘藍是台灣最重要的葉菜類蔬菜，本研究之目的在提高甘藍小孢子培養技術的效率，用以建構甘藍雙單倍體 (doubled-haploid; DH) 生產系統，加速甘藍育種流程。篩選市售甘藍共14 個栽培種，其中13 個栽培種之小孢子在培養後具有胚分化反應，以取自2.50–3.50 mm 大小花蕾具有高於或等於3.51–4.50 mm 大小花蕾之胚分化率，其中以「金春」和「新威」栽培種的胚分化率最高，分別為15.89 及10.17 個胚/皿。比較NLN [Nitsch & Nitsch medium modified by Lichter (1981)] 培養液中鹽類濃度及活性炭與瓊脂醣懸浮液組成對於「金春」和「新威」甘藍小孢子胚分化率的影響，兩栽培種皆以1/2 NLN 較全量NLN 培養液為佳，但活性炭與瓊脂醣懸浮液處理間則不具顯著差異。比較「金春」和「新威」甘藍小孢子在含有13% 蔗糖或麥芽糖之培養液中培養，或先以含有16% 蔗糖之培養液培養2 d 後，再將蔗糖濃度降至10% 繼續培養，共3 種處理，結果顯示兩栽培種皆以含13% 蔗糖處理可獲得最高之胚分化率。比較32℃及35℃高溫處理1 d 後，再分別於22℃或25℃中靜置培養對「新威」小孢子胚分化的影響，結果顯示僅第一階段高溫處理的影響效果顯著，其中以32℃處理1 d 再續以25℃培養可獲得之胚數最高，為每皿14.00 個胚。在胚發芽率方面，「新威」甘藍的子葉期胚經4℃脫水1 wk 後，接種於含有16 g L-1 洋菜的培養基中，發芽率可達91.81%；但「金春」使用相同處理之發芽率僅27.77%。將4℃脫水1 wk 後之「金春」小孢子胚接種於含有不同濃度洋菜的培養基中於室溫培養，結果顯示10–16 g L-1 洋菜未能提高「金春」之發芽率；但若將小孢子胚先接種於16 g L-1 洋菜培養基，同時置於4℃培養1 wk，之後移至室溫繼續培養，可將「金春」之發芽率提高至94.00%。以流式細胞儀分析「金春」和「新威」甘藍的DH 植株比例，分別為53.4% 和12.5%，顯示不同栽培種小孢子胚染色體之自然倍加比率差異大。