甘藷羽狀斑駁病毒反轉錄恆溫環狀擴增檢測技術 (RT-LAMP) 之建立與應用 - 農業知識入口網

病毒病害為限制甘藷生產的重要因子，其中由馬鈴薯Y 病毒屬 (Potyvirus) 中之甘藷羽狀斑駁病毒 (sweet potato feathery mottle virus; SPFMV) 引起之病害，為全球甘藷栽培區廣泛發生之病毒病害。甘藷健康種苗的生產與早期的病毒診斷鑑定皆需仰賴快速可靠的病毒檢測技術，亦是有效防治病毒病害的重要關鍵。本研究建立單步驟反轉錄恆溫環狀擴增 (reverse transcription loop-mediated isothermal amplification; RT-LAMP) 檢測技術，藉以檢測SPFMV，並利用比色法，藉hydroxy naphthol blue 作為指示染劑，以利肉眼辦別反應之結果。以此技術實際檢測罹病甘藷植物總量RNA，最佳反應條件為63℃、45–60 min；可檢測的最低RNA 濃度為237.9 × 10-5 ng μL-1，相較於反轉錄聚合酵素連鎖反應 (reverse transcription polymerase chain reaction; RT-PCR)可檢測的最低RNA 濃度為237.9 × 10-3 ng μL-1，顯示RT-LAMP 之檢測靈敏度較RT-PCR 高100 倍。此外，該RT-LAMP 技術亦成功應用於田間甘藷之SPFMV 檢測，顯示RT-LAMP 檢測技術是具有快速、專一且靈敏之SPFMV 檢測方法，未來可優化目前種苗檢定技術與提供給甘藷業者使用。