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烏魚系群鑑定快速檢測試紙之研發
過去的研究顯示,在烏魚養殖過程中,3齡時收獲的NWP1雌魚通常具有較低的性腺指數 (gonadosomatic index, GSI),並且不存在發育中卵巢。NWP2雌魚無論是2齡或3齡,通常都具有較高的GSI,並顯示出不同的卵巢大小,在相同水產養殖條件下,NWP3雌魚的體重和卵巢重量明顯大於NWP2雌魚。因此,儘管NWP2雌魚產生具有經濟價值的卵巢,但是NWP3雌魚比NWP2雌魚更有產生較大卵巢之潛力 (Chien et al., 2015, 2018) 而臺灣目前養殖烏魚苗的來源皆為野生撈捕本所於2021年起啟動「提升臺灣烏魚耐候韌性養殖之分子鑑定技術應用」研究計畫,目標在篩選高結子率的烏魚系群,為未來人工魚苗生產建立種魚的基礎,另外也為因應氣候變遷所造成烏魚苗系群來源之不確定性,藉由分子生物鑑定技術益助烏魚養殖產業之基盤韌性,減少因異常氣候對產業之衝擊。計畫起初2年,我們完成臺灣南北養殖場採集養殖成烏共1,000尾之樣品,經DNA分析結果顯示98% 為黑潮型 (NWP2),1% 強為溫帶型 (NWP1),1% 弱為熱帶型 (NWP3),意味臺灣養殖烏魚的系群大多為黑潮型,第3年完成建立試紙型臺灣烏魚系群NWP1與NWP3鑑定套組技術。
此一鑑定技術係結合重組聚合酶擴增 (recombinase polymerase amplification, RPA) 反應與流動相反應試紙條之偵測方法而成的檢測技術。重組酶聚合酶擴增主要依賴能結合單鏈核酸 (oligonucleotides) 的重組酶、單鏈DNA結合蛋白 (SSB) 和鏈置換DNA聚合酶等三種酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,最佳反應溫度在37-42℃。一般在10-20分鐘內獲得可檢出擴增產物。
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