當歸、丹參萃取物對抑制癌細胞之影響--材料與方法-1 - 農業知識入口網

一、當歸與丹參的萃取方式
（一）樣品處理：

1. 當歸樣品：當歸來源為花蓮吉安鄉10月份種植，隔年7月份收穫之新鮮當歸(A. acutiloba)根部。
2. 丹參樣品：丹參來源為花蓮吉安鄉10月份種植，隔年9月份收穫之新鮮丹參(S. miltiorrhiza) 根部。
3. 樣品製備：新鮮根部以40℃熱風乾燥24小時，再以粉碎機磨成粉末備用。

 （二）樣品溶液製備：
各取1.0 g的當歸與丹參粉末，加入10 ml 水或乙醇，以不同溫度萃取1小時，再以0.2 μm濾膜過濾備用。
（三）萃取條件：
當歸與丹參樣品溶液的萃取條件，分別為A: 60℃水、B: 80℃水、C: 100℃水、D: 60℃乙醇及E: 80℃乙醇等。在細胞試驗部分，是以熱水或乙醇萃取，來模擬典型的藥膳烹調方式。乙醇萃取物移除乙醇成分後，再以DMSO溶解進行抑制癌細胞之相關試驗。
 （四）有效成分含量分析：當歸與丹參的有效成分含量，以HPLC進行定量分析。
 1. 當歸之有效成分分析
阿魏酸與藁本內酯是以高效液相層析儀(High Performance Liquid Chromatography；簡稱HPLC) 分析，HPLC型號為Waters 2695，光電二極體偵測器(Photodiode Array Detector) 型號為：Waters 2998。分析管柱採HypURITY C18 (250 × 4.6 mm)，吸光值偵測設為284 nm，樣品注射量為20 μl。分析方式採用梯度模式，沖提溶液分為：A: acetonitrile；B: 1% acetic acid 水溶液；C: methanol，起始時間時A 5%＋B 95%；10 min時A 35%＋B 65%；30 min時A 70%＋B 30%；40 min時A 95%＋B 5%，分別對不同溶液梯度濃度轉換；41 min時C為100% 維持至50 min，流洗管柱中殘餘的化合物；51 min時換回起始條件A 5%＋B 95%。當歸標準品之阿魏酸及藁本內酯購自台灣默克股份有限公司(Merck Ltd., Taiwan)。
 2.  丹參之有效成分分析
丹參酚酸B與丹參酮IIA是以高效液相層析儀(High Performance Liquid Chromatography；HPLC)分析，HPLC 型號為Waters 2695，光電二極體偵測器（Photodiode Array Detector）型號為：Waters 2998。分析管柱採HypURITY C18 (250 × 4.6 mm)，檢測波長為254 nm，樣品注射量為10 μl。採用梯度模式分析，沖提溶液分為：A: acetonitrile；B: 1% acetic acid 水溶液；C: methanol，起始時間時A 25%＋B 75%；15 min時A 25%＋B 75%；20 min時B 100%；25 min時B 100%，分別對不同溶液梯度濃度轉換；26 min時C 100%維持至30 min，流洗管柱中殘餘的化合物；31 min時換回起始條件A 25%＋B 75%。丹參標準品丹參酚酸B、丹參酮IIA購自台灣默克股份有限公司(Merck Ltd., Taiwan)。