栽培方式對黨參植株各部位的黨參炔苷及抗氧化能力之影響--材料與方法--03 - 農業知識入口網

三、黨參炔苷之分析及定量方法

分析檢測儀器為超極致效能液相層析儀（Ultrahigh Performance Liquid Chromatography；UPLC），為Waters ACQUITY UPLC®偵測分析系統（型號UPPDA-L），配備有高效能液相層析系統（ACQUITY LC system;Waters,USA）、自動樣品進樣系統（ACQUITY Automatic sampler;Waters,USA）及光電二極體偵測系統（ACQUITY Photodiode Array Detector system;Waters,USA），用於黨參各部位樣品中黨參炔苷之定性與定量分析。

取1ml樣品萃取液，以0.22µm的過濾膜過濾後，裝入樣品瓶內，注射量2µl的樣品透過自動進樣至分析管柱後（ACQUITY UPLC BEH C18 Column,100×2.1mm,1.7µm particle;Waters,USA），以流速0.4mL/min在35℃溫度下，以改變移動相A（ddH2O）及移動相B（methanol）（Merck Darmstadt,Germany，HPLCgrade）來進行樣品梯度沖提，樣品梯度沖提條件如下：移動相A維持線性梯度於0-8min由95→5%，移動相A於8-12min維持在5%，移動相A於12-15min由5→95%，流洗分析管柱中殘餘的樣品，並再平衡回到下一次準備進樣時之移動相梯度比例狀態。每次進樣之梯度沖提分析時間為15min，以UPLC-DAD偵測分析系統測定黨參中之有效成分黨參炔苷，利用光電二極體偵測器於偵測波長267nm下，測定樣品中之吸光值（陳等，2014；Kimetal.,2014）。

黨參炔苷（lobetyolin）（成都普瑞法科技開發有限公司）定量檢量線各點配製濃度25、50、100、200µg/ml，黨參炔苷檢量線之R2=0.9994（y=5101.4x+228.7,y代表吸光值;x代表濃度），黨參炔苷偵測吸光波長為267nm。每一個黨參樣本檢品進樣三次，再以建立之黨參炔苷檢量線分別計算其濃度，單位以mg/gDW表示，DW（dryweight）為乾重，並計算其平均值及標準差。