花蓮亞蔬五號番茄農桿菌基因轉殖系統之建立--結果-3 - 農業知識入口網

結果
二、農桿菌感染處理對番茄培植體再生率之影響
番茄培殖體切好後，浸漬於O.D_.600＝0.6-0.8及O.D_.600＝0.8-1.2菌液濃度，以O.D_.600＝0.6-0.8菌液濃度之菌液感染番茄培植體之處理篩選後再生率為33.1％，高於O.D_.600＝0.8-1.2處理者（22.8％），但差異不顯著。培植體與菌液浸泡感染的時間亦以感染30分鐘處理者篩選後再生率（33.1％）較感染10分鐘（28.9％）或感染60分鐘（31.7％）者為高。AS濃度以200-400μM處理者有較高的再生率（27.3％及33.1％），不添加AS處理之培植體則在再生篩選培養基上不會分化再生芽體，且最後會褐化死亡。共培養2-3天處理篩選後再生率（33.1％-34.2％）高於共培養1天（23.4％）處理者（表二），但共培養3天處理者在抗生素篩選時容易有殘留的農桿菌長出，造成組織培養上的不便，即使以Timentin清洗殺菌後亦會有殘留的農桿菌長出。因此轉殖程序初步訂定如下：以番茄8-10天苗齡下胚軸及子葉切段浸泡在感染培養基30分鐘，再移至共同培養基黑暗下共培養2天，感染培養基及共同培養基以再生芽體數最佳之S1-1、MSG1及B5三種處理添加AS 400μM為主，共培養後再進行再生及篩選程序。
表二、菌液濃度、感染時間、acetosyringone濃度及共培養天數對花蓮亞蔬五號番茄以農桿菌感染篩選後再生率之影響