花蓮亞蔬五號番茄農桿菌基因轉殖系統之建立--結果-5 - 農業知識入口網

結果
四、GUS基因化學呈色檢定、PCR檢定及南方雜交檢定
將莖、葉為GUS基因染色全為藍色之擬轉殖植株，移至隔離溫室種植，將其根、莖、葉、花、果實及種子取下進行X-Gluc基因染色如圖二，證實全株表現GUS基因的植株，可以經由以上轉殖技術獲得，並可以在隔離溫室正常生長及結實。
圖二、番茄‘花蓮亞蔬五號’基因轉殖植株根(a)、葉(b)、各時期的花(c)及兩生長時期的果實(d)經X-Gluc染色呈現藍色現象。
轉殖番茄DNA以GUS723引子進行PCR反應，經電泳後，在723bp處有一明顯條帶，而未轉殖之對照則無此條帶（圖三），此條帶經過回收定序之後，比對NCBI資料庫確定為GUS基因片段無誤，顯示以PCR分析證明此擬轉殖株確有基因被轉殖進入。經過各部位DNA之PCR檢測顯示轉殖植株的根、花、果及葉片的基因組中亦證實有GUS基因被轉殖進入（圖三）。
圖三、轉殖基因番茄植株運用PCR檢測之產物電泳圖
(a)以引子GUS723進行PCR增幅產物，欄位T：轉殖番茄DNA，欄位CK：沒有基因轉殖之對照植株，欄位M：100bp Marker
(b)以引子GUS179進行PCR增幅產物，欄位1-3：根DNA，4-6：花DNA，7-9：果DNA，10-12：葉DNA，13-15：沒有基因轉殖之對照植株葉片DNA，欄位M：100bp Marker
經過三種限制酵素酶切電泳後經南方雜合檢測結果顯示，在AvaI酶切的lanel有3個條帶，而NcoI及EcoRI酶切者有兩個條帶（圖四），表示轉殖植株的基因組中有至少兩個GUS基因片段被轉殖進入。
圖四、基因轉殖番茄植株DNA以三種限制酶AvaI, NcoI, EcoRI酶切後以帶有GUS基因片段之放射線探針進行南方式雜交法之條帶圖。
欄位M為1Kp之Marker，條帶由上而下依次為10, 9, 7, 6, 5,4,3,1Kp。