花蓮亞蔬五號番茄農桿菌基因轉殖系統之建立--結果-4 - 農業知識入口網

結果
三、篩選方法對轉殖效率的影響
番茄下胚軸經共培養處理後，若先不以抗生素篩選，2或4週後再以kanamycin 50mg/L篩選，其再生率為33.1％-67.2％，且可獲得較多通過抗生素篩選的再生植株（22-124株），雖然經過PCR檢測為陽性反應，但經X-Gluc染色分析均為嵌合體（表三），也就是並非全株染色後都呈藍色，有的部位在以酒精去除葉綠素後呈現白色。先以kanamycin 20 mg/L再以kanamycin 50 mg/L篩選的方法雖然通過抗生素篩選的株數較少（21-48株），但全株以X-Gluc染色都呈藍色，表示並非嵌合體，而表現CaMv 35S啟動子驅動的全株具有GUS基因表達現象。若培殖體開始就以hygromycin 50 mg/L篩選，則在篩選後2-4週便陸續褐化死亡，沒有芽體再生（表三）。
以含10g/L glucose之感染及共同培養基處理，以表三方法4進行篩選，在48株初步通過抗生素篩選的植株中有7株具有GUS基因全株表達現象，轉殖效率較其他培養基為高。
表三、篩選方法及共培養基對番茄亞蔬五號基因轉殖之影響