花蓮亞蔬五號番茄農桿菌基因轉殖系統之建立--討論-3 - 農業知識入口網

討論
許多報告的試驗步驟都在共培養時加入馬鈴薯、矮牽牛及番茄的供養細胞（Fillati et al., 1987; Hamza and Chupeau, 1993; Von Roekel et al., 1993; Fary and Earle, 1996; Ling et al., 1998），而Davis 等人（1991）認為添加acetosyringone 處理之轉殖效率高於受傷處理，Fillati 等人（1987）報告顯示添加acetosyringone（AS）效果與加供養細胞處理差異並不顯著，Lipp João及Brown（1993）則認為添加AS可增加轉殖效率，本試驗結果顯示添加AS的確影響轉殖成功率，添加供養細胞時，培養及繼代維持作業繁瑣，因此共培養時以添加AS較易作業。
表三之3種篩選方法中，以先移至不含抗生素之再生培養基2週後或4週後再移至含高濃度抗生素之再生篩選培養基的方法（表三，方法1、2）及先移至含低濃度抗生素培養基兩週後再移至含高濃度抗生素之再生篩選培養基（表三，方法4）可以產生轉殖植株，而共培養後後立即移至高濃度抗生素之再生篩選培養基則無GUS基因表現之植株（表三，方法3），顯示除了上述因子之外，轉殖後之篩選方式亦是一個重要因子，但目前並沒有試驗報告討論此項因子，推測可能是番茄培植體切口轉殖成功之細胞數較少，若一開始就以高濃度抗生素篩選，使附近細胞迅速死亡，而轉殖細胞接觸培養基機會低，營養供給均仰賴鄰近細胞之幫助，若鄰近細胞死亡，則此轉殖細胞靠自營方式生存之機率極低，加上鄰近細胞迅速死亡可能會放出一些不利生長之酚類化合物等物質，亦不利於此轉殖細胞之生長。而轉殖細胞與沒轉殖基因細胞的生長分化是一種彼此競爭的狀態，這可以解釋若開始不加抗生素，則轉殖細胞與沒轉殖細胞彼此生長互相嵌合而易分化成嵌合體植株。因此在轉殖程序後，開始予以低濃度抗生素處理，使沒轉殖基因的細胞生長緩慢但不至於死亡，卻可以使轉殖細胞正常分化的機率增加，可在後續形成再生植株時減少形成嵌合體之機率。以液體培養基進行基因轉殖可增加番茄基因轉殖效率到達36.4％（Verlcheva et al., 2005），可能就是因為基因轉殖的細胞可充分接觸到培養基，而不會有上述因為接觸不到培養基死亡的情形，但液體培養基因轉殖必須每天更換培養基到芽體再生為止，步驟繁瑣，除非轉殖效率非常低，為節省勞力和降低污染機率，不建議採用液體培養的方式。