花改場--花蓮吉安地區龍鬚菜病毒病的週年發生率及田間防治研究--03 - 農業知識入口網

材料與方法

一、供試材料

本研究於花蓮縣吉安鄉龍鬚菜產區進行，於本場溫室進行接種試驗，病毒接種所用之龍鬚菜種瓜於吉安鄉試驗田區採集。

二、病毒種類鑑定

選擇 5 處龍鬚菜田區，挑選具病毒病徵植株採取葉片共計 20 株，以 Geneaid○R Total RNA Mini Kit 抽取核酸後，以葫蘆科常見病毒之專一性引子對進行聚合酶連鎖反應（Polymerase chain reaction, PCR）與反轉錄 PCR（Reverse Transcriptase PCR, RT-PCR），包含：胡瓜綠斑嵌紋病毒（Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV）( Daryono et al.,2012)，矮南瓜黃化嵌紋病毒 (Zucchini yellow mosaic virus, ZYMV) ( Athanasios et al.,2018)，胡瓜嵌紋病毒 (Cucumber mosaic virus, CMV) (Azizi et al.,2014)、瓜類退綠黃化病毒 (Cucurbit chlorotic yellows virus, CCYV) (Gu et al., 2011) 及南瓜捲葉菲律賓病毒 (Squash leaf curl Philippines virus，SLCPHV，使用的引子對序列 SqLCV250F: CTT TCC GCA GGT TGT GGT TG、 SqLCV250R: CAT CAG GCG CAG ACG AAT TG)。

三、龍鬚菜產區病毒病發生率調查

（一）     田間發病率調查

1.      試驗方法：選擇面積 0.2 ha 以上龍鬚菜田區共計 10 處，其中種植一年以內田區 5 處，種植 2 至 4 年田區 5 處，每處田區隨機選擇 200 株龍鬚菜進行觀察。

2.      調查方法：以植株外觀判斷是否為病毒感染，計算病毒發病率（%） = [（病毒病徵出現植株/200 株）×100%]，自 2019 年 9 月至 2021 年 2 月，每月進行 1 次調查，共計 18 次。

（二）     植株病毒檢測

挑選 2 年生田區與 3 年生田區各 1 塊，各田區逢機挑選 35 株龍鬚菜，觀察病徵出現比例，並以 SqLCV250F/ SqLCV250R 專一性引子對進行 PCR 檢測病毒罹病率。