花改場--花蓮吉安地區龍鬚菜病毒病的週年發生率及田間防治研究--04 - 農業知識入口網

四、傳播方式研究

（一）種瓜傳播試驗

於田間選擇病毒病徵明顯之龍鬚菜 12 株採集種瓜，每株採集 1 顆共計 12 顆，供試植株以 SqLCV250F/ SqLCV250R 專一性引子進行 PCR 確認帶有 SLCPHV。採集之種瓜栽培於無粉蝨之隔離帳籠內，每月採集一次植株新葉，以 PCR 檢測是否感染，持續檢測 6 m（1-6 月）。

（二）機械傳播試驗

以機械方式接種帶有 SLCPHV 龍鬚菜葉片，接種時以 5 倍量（W/V）之 0.01 M 磷酸緩衝溶液（phosphate buffer, pH7.0），將病葉磨碎過濾後，以棉花棒沾取汁液輕拭灑有 400 目金鋼砂之健康龍鬚菜葉片，約 2-3 min 後以 RO 水洗去多餘汁液，處理植株共計 12 株，接種前先以 PCR 確認未帶有 SLCPHV 病毒，接種後栽培於無粉蝨之隔離帳籠內，每月檢測新葉是否感染病毒，持續檢測 6 m（1-6 月）。

五、田區粉蝨族群監測

從 109 年 1 月開始，於吉安鄉選擇 5 塊龍鬚菜田，田區大小約 0.2 ha，逢機設置 3 片黃色黏板（1628 cm），每週更換並計算黏板上粉蝨數量。

六、田區粉蝨帶毒率

挑選龍鬚菜田區兩處，每區隨機抓 20 隻粉蝨成蟲，成蟲冷凍後萃取核酸：每隻成蟲以QuickExtrationTM DNA Extraction Solution 1.0（Lucigen, USA）30 ul 磨碎，水浴法加熱 65℃ 15 min，乾浴法加熱 98℃ 2 min，保存於-20℃，每隻粉蝨檢測 SLCPHV，計算帶毒率（%） = [（帶毒粉蝨隻數/20 隻）×100%]。

七、龍鬚菜病毒病田間防治試驗

選擇龍鬚菜試驗田區 2 處，種植期分別為 2 年生及 3 年生田區，畦面寬度為 1.2 m，畦溝寬 0.5 m，每小區長度 12 m，每區 24 株龍鬚菜，試驗設計採完全逢機設計，4 處理，每處理 3 重複，各試驗處理如下：(1) 苦楝油（良農現代化農業科技股份有限公司）400 倍稀釋液；(2) HL_PBS 400倍稀釋液（本場研發之誘導抗病毒劑）；(3) 苦楝油（良農現代化農業科技股份有限公司）400 倍混合 HL_PBS 400 倍；(4) 不處理對照組（無使用任何粉蝨或病毒抑制相關資材）。處理組每 7 d施用 1 次，連續處理 4 次後，以目視病徵進行病毒病發病率調查，發病率（%） = [（病毒病徵出現植株/24 株）×100%]。