花蓮地區有機稻米產銷價格調查及其抗氧化能力之分析與比較--材料與方法-1 - 農業知識入口網

一、市場調查及分析
從花蓮縣及宜蘭縣的一般銷售管道調查東部生產之市售有機及慣行栽培稻米的種類及價格，並選取相同品種之樣品進行後續抗氧化能力及抗氧化成分分析。
二、抗氧化能力及抗氧化成分分析
將選出之樣品粉碎後以甲醇進行萃取，萃取後將濾液進行總抗氧化能力(Oxygen radical absorbance capacity, ORAC)分析，其它樣品則以乙醇進行萃取後分析清除DPPH (α,α-diphenyl-β-picryhydrazyl)自由基能力、鐵離子螯合能力(Chelating ability ferrous ions)及還原力(Reducing power)等三種抗氧化能力及總酚類化合物(Total polyphenol)含量、總類黃酮(Total flavonoid)含量兩種抗氧化成分之分析。
（一）樣品製備
1. 樣品前處理：將樣品以研磨機磨碎成粉末，置於茶色瓶中，並存放於-20℃冰箱備用。
2. 稻米萃取液製備：取20 g樣品粉末置於血清瓶中，加入100 ml 70%甲醇或乙醇溶劑，於室溫下以超音波震盪萃取15 min後，以Whatman No. 1濾紙過濾得到濾液，過濾後之殘渣再依上述步驟進行第二次萃取。收集二次之稻米萃取濾液，存放於-4 ℃冰箱中備用。
（二）抗氧化力分析
1. 總抗氧化能力分析
參考Davalos等人(2004)、Prior等人(2003)與Huang等人(2002)的方法，系統反應總體積為200 μl，反應液中分別含有稻米萃取液25 μl、75 mM磷酸緩衝溶液75 μl、38.4 nM Fluorescein 75 μl及64 mM AAPH 25 μl，螢光檢測的激發光波長為485 nm，放射光波長為528 nm，每90秒檢測一次，共檢測100 min。將樣品在各時間點的相對螢光強度對時間作圖，所得之曲線面積(AUC)扣除空白組之曲線面積(AUC)得到淨螢光衰退面積(net AUC)。以Trolox之淨螢光衰退面積對其濃度作標準曲線，將各樣品之淨螢光衰退面積代入即可得到相對之Trolox濃度。計算公式如下：
AUC=(0.5＋f1/f0＋f2/f0＋……＋fi/f0)×CT
AUC：area under the curve
f0：initial fluorescence reading at cycle
f_i：fluorescence reading at cycle i
CT：cycle time in minutes
net AUC：AUC sample－AUC blank