花蓮地區有機稻米產銷價格調查及其抗氧化能力之分析與比較--材料與方法-2 - 農業知識入口網

2. 清除DPPH自由基能力
參考Shimada等人(1992)的方法，取4 ml之稻米萃取液，加入1 ml 0.5 mM DPPH甲醇溶液，均勻混合後，靜置反應30 min，於517 nm測定其吸光值，並依下列公式計算DPPH清除能力(Scavenging effects)：
DPPH 清除能力(%)=【1-(樣品A₅₁₇ nm /控制組A₅₁₇ nm)】×100
3. 鐵離子螯合能力
參考Dinis等人(1994)的方法，取4 ml之稻米萃取液，依序加入0.2 ml 2 mM FeCl₂溶液、0.4 ml 5 mM Ferrozine溶液，均勻混合後，反應10 min，於562 nm測定其吸光值，並依下列公式計算鐵離子螯合能力：
鐵離子螯合能力(%)=【1-(樣品A₅₆₂ nm /控制組A₅₆₂ nm)】×100
4. 還原力
參考Oyaizu(1986)的方法，取2.5 ml之稻米萃取液，依序加入2.5 ml pH 6.6磷酸緩衝溶液、2.5 ml 1%赤血鹽，均勻混和後於50 ℃水浴反應20 min，於 -20℃的冰箱中急速冷卻，再加入2.5 ml 10%三氯醋酸(TCA)溶液，於5000 rpm離心10 min，取上清液5 ml，再加入5 ml蒸餾水、1 ml 0.1% FeCl₂溶液，混合均勻，反應10 min，於700 nm測定其吸光值。
（三）抗氧化成分分析
1. 總酚類化合物含量
參考Singleton和Rossi (1965)之方法，取0.5 ml之稻米萃取液，依序加入0.5 ml Folin-Ciocalteu (FC)試劑、2 ml 2% Na₂CO₃、2.5 ml蒸餾水，混合均勻後，靜置反應50 min，於760 nm測定其吸光值，並與沒食子酸(Gallic acid)之標準曲線對照，計算出樣品中總酚類化合物的含量。
2. 總類黃酮含量
參考Jia (1999)之方法並經修飾後進行試驗，取適當濃度之稻米萃取液0.5 ml，加入1.5 ml無水酒精、0.1 ml 10%硝酸鋁(Aluminum nitrate)、 0.1 ml 1M醋酸鉀(Potassium acetate)及2.8 ml之去離子水，混合均勻後靜置反應50 min，以分光光度計於415 nm下測其吸光值，並以Quercetin之標準曲線對照，計算出樣品之總類黃酮的含量。
三、統計分析
所有樣品皆進行三重覆分析，所得之結果先進行變方分析(Analysis of variance)，再以最小顯著差異性測驗(LSD, Least significance difference test)，並在5%的顯著水準下進行各處理間平均值差異之比較(呂等 2006)。